Cytométrie en flux

 Brochure PDF

La cytométrie en flux est une technique qui permet de mesurer et d’analyser différentes caractéristiques physiques de cellules ou particules. Les cellules en suspension passent une à une devant un ou plusieurs faisceau(x) laser et des détecteurs captent les signaux de fluorescence émis par chaque cellule de même que la lumière diffusée. Les données ainsi recueillies se présentent sous forme de graphiques ou d’histogrammes auxquels s’ajoutent des statistiques concernant les populations cellulaires et les paramètres étudiés (%, CV, intensité de fluorescence, etc.). Par ailleurs, certains appareils permettent de faire un tri, c’est-à-dire de séparer physiquement des sous-populations de cellules selon des critères définis : les cellules ainsi isolées peuvent alors servir pour d’autres types d’expériences.

La cytométrie en flux sert le plus couramment aux applications suivantes :

• l’immunophénotypage
• l’étude du cycle cellulaire et de l’apoptose
• l’analyse de prolifération cellulaire
• l’analyse de cytokines intracellulaires
• l'étude de voies de signalisation (phospho-protéines)
• la mesure du niveau d’expression de gènes avec protéines fluorescentes (GFP, YFP, etc.)
• la mesure du Ca²⁺ intracellulaire, pH intracellulaire

La plateforme de cytométrie en flux de l’IRIC met à la disposition des chercheurs de l’IRIC et de l’Université de Montréal des services de première qualité. Elle accueille aussi des scientifiques externes en provenance du milieu universitaire et de l’industrie dans le cadre de collaborations et d’ententes de recherche. Son personnel offre également un service de consultation et peut former les utilisateurs à l’exploitation des instruments.

Notre plateforme de cytométrie en flux est située au rez-de-chaussée du Pavillon Marcelle-Coutu, à proximité de la plateforme de bio-imagerie de l’IRIC.

Services

Les services de cytométrie offerts par l’IRIC sont les suivants :

• Tri de cellules : 1 à 4 voies, en tubes, en plaques ou sur lames
• Acquisition/analyse avec supervision de l’opérateur
• Acquisition/analyse sans supervision (pour l’utilisateur expérimenté ou régulier)
• Station d’analyse munie des logiciels DiVa, FlowJo, FCS Express3, ModFit LT
• Formation à l’acquisition et l’analyse
• Conseils en matière de choix de fluorochromes et de protocoles pour utilisations variées
• Consultation dans l’élaboration de nouvelles applications technologiques

L’exploitation de notre système de tri de cellules est limitée exclusivement au personnel de la plateforme de cytométrie en flux.

Instrumentation

Nous exploitons des appareils à la fine pointe de la technologie, notamment un analyseur de cellules BD LSR II et un trieur BD FACSAria qui offrent un système optique entièrement repensé qui améliore la résolution et la sensibilité de détection des signaux. Ces deux instruments sont dotés d’un système électronique digital qui permet une analyse très rapide des données. De plus, grâce au logiciel DiVa, la compensation entre tous les signaux de fluorescence peut se faire de façon automatique, ce qui facilite les analyses multiparamétriques. La plate-forme est également doté d’un séparateur par billes magnétiques automatisé de table autoMACS, lequel peut trier des millions de cellules par seconde que ce soit pour une sélection positive ou pour une déplétion.

Analyseur de cellules BD LSR II
Le LSR II compte 3 lasers qui permettent de détecter jusqu’à 12 paramètres et 10 fluorochromes :

• 488 nm : 7 détecteurs (SSC + 6 fluorochromes)
• 633 nm : 2 détecteurs
• 355 nm (UV): 2 détecteurs

 Haut de la page   

Trieurs BD FACSAria
Nos deux trieurs de cellules offrent les possibilités suivantes :

• Tri de 1 à 4 voies
• Tri en plaques
• Tri sur lames
• Échantillons à trier dans des tubes de 1ml, 5ml ou 15ml à fond conique
• Tubes à collection : 1ml, 5ml ou 15ml à fond conique
• Température ajustable pour la chambre des échantillons (4ºC, 20ºC, 37ºC ou 42ºC)
• Température ajustable pour tubes à collection de 5ml ou 15ml (2ºC à 50ºC)
• Buses de 70µm et 100µm
• Tri à différentes pressions selon taille et fragilité des cellule

Trieur de cellules BD FACSAria 1
Cet appareil compte 3 lasers qui permettent de détecter jusqu’à 15 paramètres et 13 fluorochromes :

• 488 nm : 8 détecteurs (SSC + 7 fluorochromes)
• 633 nm : 3 détecteurs
• 407 nm (violet): 3 détecteurs

 Haut de la page   

Trieur de cellules BD FACSAria 2
Cet appareil compte 2 lasers, offrant la possibilité de détecter 12 paramètres et 10 fluorochromes.

• 488 nm : 8 détecteurs (SSC + 7 fluorochromes)
• 633 nm : 3 détecteurs

Séparateur de cellules autoMACS
Le séparateur autoMACS offre plusieurs programmes de séparation afin d’optimiser le tri de chacune de vos préparations cellulaires. Par exemple, l’utilisation des programmes de sélection positive du séparateur autoMACS permet d’isoler jusqu’à 2 X 108 cellules cibles pures en quelques minutes.
Données techniques :

• programmes : 9 standards
• durée des programmes : 2,5-10 minutes par ml d’échantillon
• vitesse : 10⁷ cellules / seconde par ml d'échantillon
• capacité des colonnes : 2 x 10⁸ cellules magnétiquement marquées 4 x 10⁹ cellules totales nucléées

Tarification

 Consultez notre grille de tarifs.

Personnes ressources

Pour obtenir plus de renseignements au sujet de notre plateforme de cytométrie en flux ou prendre rendez-vous, veuillez communiquer avec :

Danièle Gagné
T + 514 343.6111 poste 1.8094
daniele.gagne@umontreal.ca

Claude Perreault, M.D., F.R.C.P.(C)

T + 514 343.6126
claude.perreault@umontreal.ca

 Haut de la page